Η δοκιμή ELISA ανιχνεύει πολλές ασθένειες, γι 'αυτό έχει ευρεία εφαρμογή στην ιατρική και πολλά άλλα. Ωστόσο, το τεστ ELISA είναι πιο γνωστό για τη διάγνωση της νόσου του Lyme. Τι είναι το τεστ ELISA; Πώς να ερμηνεύσετε τα αποτελέσματα; Ποια είναι η τιμή του τεστ;
Πίνακας περιεχομένων:
- Δοκιμή ELISA - τι ανιχνεύει; Εφαρμογή του τεστ ELISA
- Δοκιμή ELISA - ποιο είναι το τεστ;
- Δοκιμή ELISA και ασθένεια Lyme - πότε πρέπει να εκτελεστεί;
- Δοκιμή ELISA - τιμή. Πόσο κοστίζει μια δοκιμή ELISA;
- Δοκιμή ELISA - αποτελέσματα. Μπορούν να είναι ψευδώς θετικά;
- Δοκιμή ELISA - αποτελέσματα. Μπορούν να είναι ψευδώς αρνητικά;
Η δοκιμή ELISA, δηλαδή η ανοσοπροσροφητική δοκιμασία που σχετίζεται με ένζυμο, είναι μια κοινώς χρησιμοποιούμενη εργαστηριακή μέθοδος που χρησιμεύει, μεταξύ άλλων, για την ποσοτική ανίχνευση αντισωμάτων στο αίμα.
Για το λόγο αυτό, το τεστ ELISA βρήκε εφαρμογή στη διάγνωση βακτηριακών παθήσεων, όπως η Lyme borreliosis.
Το πλεονέκτημα της μεθόδου ELISA είναι η απλότητα και η δυνατότητα ταχείας εφαρμογής καθώς και η υψηλή ευαισθησία. Η μέθοδος ELISA εκτελείται χρησιμοποιώντας ειδικές πλαστικές πλάκες με φρεάτια γεμάτα π.χ. Borrelia πρωτεΐνες (αντιγόνα) και ειδικά μονοκλωνικά αντισώματα, τα οποία έχουν σχεδιαστεί για την ανίχνευση αντισωμάτων στο δείγμα του ασθενούς.
Δοκιμή ELISA - τι ανιχνεύει; Εφαρμογή του τεστ ELISA
Η υψηλή ευαισθησία και απλότητα της μεθόδου ELISA την καθιστούσε εφαρμόσιμη στη διάγνωση πολλών ασθενειών, αλλά είναι πιο γνωστή ως η διαγνωστική μέθοδος της νόσου Lyme.
Στην περίπτωση της διάγνωσης της Lyme borreliosis, η λεγόμενη έμμεση ELISA, η οποία επιτρέπει την ανίχνευση συγκεκριμένων IgM ή IgG στο υπό δοκιμή υλικό. Με τον ίδιο τρόπο, τα αντισώματα μπορούν να ανιχνευθούν για διάγνωση:
- ιογενείς λοιμώξεις: ιοί έρπητα (έρπης, ιός έρπητα ζωστήρα, Epstein-Barr, κυτταρομεγαλοϊός), HIV, ιοί ηπατίτιδας (HBV και HCV)
- πρωτοζωικές λοιμώξεις: τοξοπλάσμωση, γαριαδίαση
- αυτοάνοσες ασθένειες: κοιλιοκάκη (αντι-tTG ή αντι-DPG αντισώματα), ασθένεια Hashimoto (αντισώματα αντι-TG και αντι-ΤΡΟ), φλεγμονώδεις παθήσεις του εντέρου (αντισώματα αντι-ASCA και αντι-ANCA)
- παρασιτικές ασθένειες και αλλεργίες στις οποίες ανιχνεύονται ειδικά IgE αντισώματα. Το αυξημένο επίπεδό τους μπορεί να υποδηλώνει την παρουσία αλλεργιών, π.χ. σε γύρη και φαγητό, ή παρασιτική εισβολή (οπλισμένη ταινία, ανθρώπινος σκουλήκι)
Υπάρχουν επίσης τροποποιήσεις στη μέθοδο ELISA (το λεγόμενο ELISA σάντουιτς), οι οποίες επιτρέπουν την ανίχνευση δείγματος πρωτεϊνών διαφορετικών από τα αντισώματα. Στη συνέχεια, ο στόχος της δοκιμής είναι να ανιχνεύσει στο βιολογικό υλικό:
- θραύσματα ιών ή βακτηρίων, συνήθως είναι αντιγόνα που χαρακτηρίζουν ένα δεδομένο παθογόνο
- ορμόνες ορού, π.χ. οιστρογόνα, προλακτίνη, TSH, fT4, κορτιζόλη
- ένζυμα, π.χ. καλπροτεκτίνη, παγκρεατική ελαστάση, αλκαλική φωσφατάση
- δείκτες όγκου, π.χ. CA-125
- η παρουσία φαρμάκων στον ορό
Αυτή η μέθοδος εφαρμόζεται επίσης στη βιομηχανία τροφίμων, όπου μπορεί να ανιχνεύσει ίχνη αλλεργιογόνων (π.χ. γάλα, φιστίκια), ΓΤΟ ή τοξίνες στα τρόφιμα.
Δοκιμή ELISA - σε τι αφορά;
Η διάγνωση, για παράδειγμα, Lyme borreliosis χρησιμοποιώντας τη μέθοδο ELISA συνίσταται στην ανίχνευση ανοσολογικών πρωτεϊνών σε βιολογικό υλικό - αντισώματα που προκύπτουν κατά τη διάρκεια της απόκρισης έναντι αντιγόνων Borrelia.
Τα αντισώματα ελέγχονται σε δύο κατηγορίες, IgM και IgG. Τα IgM είναι τα πρώτα αντισώματα που εμφανίζονται στο σώμα όταν έρχονται σε επαφή με βακτήρια και μειώνονται με την πάροδο του χρόνου.
Η θέση τους λαμβάνεται από πιο επίμονα αντισώματα IgG που μπορούν να παραμείνουν στο σώμα για αρκετές δεκάδες χρόνια.
Με αυτόν τον τρόπο, η παρουσία βακτηριδίων στο σώμα ελέγχεται έμμεσα ανιχνεύοντας αντισώματα που κατευθύνονται ειδικά έναντι των σπειροχαιτών Borrelia.
Τα αντισώματα σε διάφορα στάδια μόλυνσης μπορεί να κατευθύνονται κατά μιας ποικιλίας πρωτεϊνών Borrelia. Για παράδειγμα, σε πρώιμο στάδιο είναι η πρωτεΐνη p41.
Στα μεταγενέστερα στάδια, όλο και περισσότερες πρωτεΐνες αρχίζουν να εμφανίζονται, όπως p21, p30, p39, p43. Αυτός είναι ο λόγος για τον οποίο η διάγνωση της νόσου του Lyme είναι εξαιρετικά δύσκολη.
Η επιλογή βακτηριακών πρωτεϊνών είναι εξαιρετικά σημαντική για το τεστ να έχει υψηλή διαγνωστική αξία. Επομένως, ρουτίνα στη διάγνωση της νόσου του Lyme, πρέπει να χρησιμοποιούνται δοκιμές ELISA γενιάς ΙΙ ή ΙΙΙ γενιάς στις οποίες επιλέγονται σύνολα πρωτεϊνών για να επιτευχθεί το πιο αξιόπιστο αποτέλεσμα.
Δοκιμή ELISA και ασθένεια Lyme. Πότε να κάνω;
Το Lyme borreliosis είναι μια βακτηριακή ασθένεια που προκαλείται από τα βακτήρια Borrelia burgdorferi και τις πολλές ποικιλίες του.
Η διάγνωση της νόσου δεν είναι εύκολη λόγω της πολυπλοκότητας της ανοσολογικής απόκρισης κατά της Borrelia και των ατελειών των εργαστηριακών μεθόδων.
Η πιο συχνά χρησιμοποιούμενη εργαστηριακή μέθοδος είναι η εξαιρετικά ευαίσθητη μέθοδος ELISA, η οποία ανιχνεύει συγκεκριμένα αντισώματα που δημιουργούνται εναντίον βακτηριακών πρωτεϊνών.
Στη διάγνωση της νόσου του Lyme, χρησιμοποιείται η έμμεση μέθοδος ELISA στην οποία διακρίνονται τα ακόλουθα στάδια:
- επώαση των φρεατίων στην πλάκα με υλικό που συλλέχθηκε από τον ασθενή, π.χ. ορό. Εάν υπάρχουν αντισώματα κατά της Borrelia στο υπό δοκιμή υλικό, συνδέονται με πρωτεΐνες στο κάτω μέρος της αντίδρασης καλά
- Στη συνέχεια, η περίσσεια ορού ξεπλένεται με ένα ειδικό υγρό πλύσης (ρυθμιστικό) και το λεγόμενο σύζευγμα, δηλ. ένα αντίσωμα συνδεδεμένο με ένα ένζυμο που συνδέεται με προηγουμένως συνδεδεμένα αντισώματα στα φρεάτια αντίδρασης
- τότε προστίθεται το υπόστρωμα για το συζυγές και λαμβάνει χώρα μια αντίδραση χρώματος (θετικό αποτέλεσμα) ή καμία αντίδραση χρώματος (αρνητικό αποτέλεσμα)
- το τελευταίο βήμα είναι η ανάγνωση από τον αναγνώστη (φασματοφωτόμετρο) της συγκέντρωσης αντισωμάτων κατά της Borrelia στον ορό του ασθενούς
Η δοκιμή ELISA για τη νόσο του Lyme πραγματοποιείται από αίμα, και στην περίπτωση νευρολογικών συμπτωμάτων (νευροβορλίωση), επίσης από το εγκεφαλονωτιαίο υγρό.
Το αρθρικό υγρό δεν πρέπει να ελέγχεται καθώς υπάρχει μεγάλη πιθανότητα ψευδώς θετικών αποτελεσμάτων.
Η βάση για τη διάγνωση της νόσου είναι τα κλινικά συμπτώματα που το δείχνουν, επιβεβαιώνονται από τα αποτελέσματα των εργαστηριακών εξετάσεων.
Η προσθήκη ενός εργαστηριακού αποτελέσματος δοκιμής χωρίς συμπτώματα δεν επιτρέπει τη διάγνωση της νόσου του Lyme, καθώς έχει αποδειχθεί ότι αντισώματα κατά της Borrelia ανιχνεύονται επίσης σε υγιείς ανθρώπους.
Η ορολογική διάγνωση της Lyme borreliosis ξεκινά με ένα ημι-ποσοτικό τεστ ELISA διαλογής. Εάν το αποτέλεσμα είναι αρνητικό, αυτό σημαίνει ότι δεν έχουν εντοπιστεί σπειροχέτες Borrelia ή ότι το αποτέλεσμα είναι ψευδώς αρνητικό.
Εάν το αποτέλεσμα είναι θετικό ή ασθενώς θετικό (διφορούμενο), θα πρέπει να διενεργηθεί επιβεβαιωτικός έλεγχος Western Blot, ο οποίος χαρακτηρίζεται από υψηλή ειδικότητα.
Αυτό επιβεβαιώνει ότι τα αποτελέσματα της ELISA είναι "αλήθεια". Κατά τη διάρκεια της διάγνωσης, δεν μπορείτε να παραλείψετε κανένα από τα παραπάνω βήματα και, για παράδειγμα, να εκτελέσετε διαγνωστικά χρησιμοποιώντας τη μέθοδο Western blot αμέσως ή να κάνετε μια διάγνωση με βάση μόνο ένα θετικό αποτέλεσμα ELISA.
Στην Πολωνία, η διάγνωση της νόσου του Lyme τελειώνει πολύ συχνά στο πρώτο στάδιο διαλογής, γεγονός που προκαλεί εσφαλμένη ερμηνεία θετικών ή ασθενώς θετικών αποτελεσμάτων.
Προτεινόμενο άρθρο:
Δοκιμή μετασχηματισμού λεμφοκυττάρων (LTT) Χρήσιμες πληροφορίεςΔοκιμή ELISA - τιμή. Πόσο κοστίζει μια δοκιμή ELISA;
Η δοκιμή κοστίζει περίπου 60 PLN και πραγματοποιείται αμέσως. Ωστόσο, μπορείτε να περιμένετε περίπου τρεις μήνες για τα αποτελέσματα της παραπομπής.
Δοκιμή ELISA - αποτελέσματα. Μπορούν να είναι ψευδώς θετικά;
Ψευδώς θετικά αποτελέσματα προκύπτουν από τη διασταυρούμενη αντιδραστικότητα IgM αντισωμάτων με άλλες πρωτεΐνες. Τα αντισώματα που παράγονται από τον οργανισμό μπορεί να «αναγνωρίσουν λανθασμένα» ένα αντιγόνο από άλλους μικροοργανισμούς ως το αντιγόνο Borrelia.
Τα πιο συνηθισμένα «λάθη» εμφανίζονται σε άτομα μολυσμένα με treponema pallidum, ιούς έρπητα και σε άτομα με συστηματικό ερυθηματώδη λύκο και άλλες ρευματικές ασθένειες.
Δοκιμή ELISA - αποτελέσματα. Μπορούν να είναι ψευδώς αρνητικά;
Ψευδώς αρνητικά αποτελέσματα μπορεί να εμφανιστούν σε πρώιμο στάδιο της λοίμωξης, οπότε η δοκιμή θα πρέπει να επαναληφθεί μετά από περίπου 3-4 εβδομάδες. Αυτό ονομάζεται ορολογικό παράθυρο, δηλαδή η αρχική περίοδος μόλυνσης κατά την οποία ο οργανισμός δεν έχει ακόμη «καταφέρει» να παράγει συγκεκριμένα αντισώματα.
Ομοίως, σε άτομα με ανοσοανεπάρκεια που δεν παράγουν αρκετά αντισώματα.
Ένα μεγάλο πρόβλημα, ειδικά σε πολύ έντονες λοιμώξεις, είναι η εμφάνιση των λεγόμενων ανοσοσυμπλέγματα που αποτελούνται από αντιγόνα Borrelia spirochetes και αντισώματα ειδικά για αυτά.
Ως αποτέλεσμα, τα αντισώματα καθίστανται «αόρατα» σε κοινώς χρησιμοποιούμενες μεθόδους όπως η ELISA, και παρόλο που υπάρχουν στο υπό δοκιμή υλικό, δεν μπορούν να ανιχνευθούν.
Σε τέτοιες περιπτώσεις, το εργαστήριο μπορεί να χρησιμοποιήσει τη διάσπαση των ανοσοσυμπλεγμάτων. Αυτή η θεραπεία έχει σχεδιαστεί για την απελευθέρωση των αντισωμάτων. Ωστόσο, αυτή η μέθοδος δεν χρησιμοποιείται ευρέως λόγω της έλλειψης τυποποίησης στα εργαστήρια.
Αξίζει να γνωρίζετεΓιατί δεν είναι εύκολη η διάγνωση της νόσου του Lyme;
Αυτό οφείλεται στην πολυπλοκότητα της ανοσολογικής απόκρισης κατά της Borrelia και στους περιορισμούς των εργαστηριακών μεθόδων. Η ποικιλομορφία των ποικιλιών και η εμφάνιση νέων που προκαλούν λοιμώξεις, ειδικά στην ευρωπαϊκή ήπειρο, δεν διευκολύνουν την ανάπτυξη αποτελεσματικών διαγνωστικών μεθόδων.
Περισσότερες ποικιλίες εμφανίστηκαν πρόσφατα στην Ευρώπη, όπως Borrelia bissetii, Borrelia valaisiana και Borrelia spielmanii. Επιπλέον, στο σώμα, οι σπιροχέτες Borrelia μπορούν να μετατραπούν σε κύστες ή να παραμείνουν σε μέρη του σώματος απρόσιτα στα κύτταρα του ανοσοποιητικού συστήματος.
Όντας έτσι «αόρατο» στο ανοσοποιητικό σύστημα. Επιπλέον, έχει αποδειχθεί ότι οι ιστοί μπορεί να περιέχουν θραύσματα βακτηρίων που έχουν έντονα προφλεγμονώδεις ιδιότητες. Πιστεύεται ότι ευθύνονται για τα χρόνια συμπτώματα της νόσου του Lyme, παρά τα αρνητικά αποτελέσματα των εργαστηριακών εξετάσεων.
Βιβλιογραφία
1. Witecka-Knysz E. et al. Νόσος του Lyme: γιατί είναι τόσο δύσκολη η διάγνωση; Laboratory Diagnostician Απρίλιος 2007.
2. Moore A. et al. Τρέχουσες οδηγίες, κοινές κλινικές παγίδες και μελλοντικές κατευθύνσεις για εργαστηριακή διάγνωση της νόσου Lyme, Ηνωμένες Πολιτείες. Emerg Infect Dis. 2016 Ιουλ; 22 (7).
3. Εργαστηριακή διάγνωση νόσων που μεταδίδονται με κρότωνες. Συστάσεις της Ομάδας Εργασίας: Εθνικό Επιμελητήριο Διαγνωστικών Εργαστηρίων, Εθνικό Ινστιτούτο Δημόσιας Υγείας-Εθνικό Ινστιτούτο Υγιεινής, Εθνικός Σύμβουλος στον τομέα των μολυσματικών ασθενειών, Τμήμα Λοιμωδών Νοσημάτων και Νευρολογικών Λοιμώξεων, Ιατρικό Πανεπιστήμιο Białystok, Πολωνική Εταιρεία ιολογίας, Βαρσοβία 2014
4. Hosseini S. et al.: Ενζυμική ανοσοπροσροφητική δοκιμασία (ELISA) Από το Α έως το Ω. Springer 2017.
